猴廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)酶聯(lián)免疫試劑盒 

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒基于檢測樣本的特異性抗體包被酶標(biāo)板，加入待測樣本，樣本與包被在酶標(biāo)板上的特異性抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。清洗后加入酶標(biāo)二抗，與免疫復(fù)合物結(jié)合，形成完整的三明治復(fù)合物。再加入底物溶液，底物在酶的作用下變色，顏色的深淺與樣本的濃度呈正相關(guān)。最后加入終止液，使反應(yīng)停止，在450nm波長下測量各孔的光密度值（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本的濃度。

猴廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)酶聯(lián)免疫試劑盒

樣本處理

1.組織取出前盡量進(jìn)行心臟灌流

2.組織表面不能有毛發(fā)等不相關(guān)組分

3.組織稱重(mg)后立即放入EP管中

4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)

5.用勻漿機(jī)進(jìn)行組織勻漿

6.離心

7.小心吸取上清

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的試劑盒，確保試劑盒的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

2. 嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格控制溫度、pH值、離子強(qiáng)度等條件，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3. 避免交叉污染：實(shí)驗(yàn)過程中要避免交叉污染，確保每個步驟使用的試劑和材料都是清潔無污染的。

4. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：實(shí)驗(yàn)操作要標(biāo)準(zhǔn)化，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，避免人為誤差對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

5. 定期校準(zhǔn)：定期對實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

6. 保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：實(shí)驗(yàn)過程中要保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以便后續(xù)分析和處理。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好所有試劑、材料和器具。

2. 溫育：將包被有特異性抗體的酶標(biāo)板放入37℃溫箱中溫育30分鐘。

3. 加樣：分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，輕輕混勻。

4. 溫育：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

5. 洗滌：清洗酶標(biāo)板，除去未結(jié)合的抗原抗體。

6. 加酶標(biāo)二抗：向各孔中加入酶標(biāo)二抗，輕輕混勻。

7. 溫育：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

8. 洗滌：清洗酶標(biāo)板，除去未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。

9. 加底物溶液：向各孔中加入底物溶液，輕輕混勻。

10. 顯色：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育15分鐘。

11. 終止：向各孔中加入終止液，混勻。

12. 測量：在450nm波長下測量各孔的光密度值（OD值）。

結(jié)果判斷:

1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計(jì)算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

試劑盒 必知說明

1）只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，

2）不能混用其他制造商的產(chǎn)品，只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會得到好的檢測結(jié)果。

3）由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。

4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑盒的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。

5）請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。

6）不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，

如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

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