犬誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2/iNOS)ELISA試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù),用合成的 HEV 多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國(guó)型 HEV 毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框 2 和開(kāi)放閱讀框 3 。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在 HEV IgM 抗體,這些抗體就會(huì)與 HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人 IgM-HRP (辣根過(guò)氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與第一次孵育結(jié)合上的 HEV IgM 抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入 TMB 底物溶液,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶 - 底物反應(yīng),只有那些含有 HEV IgM 抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在波長(zhǎng) : 450nm 處測(cè)量 O.D. 值 , 按照本 HEV IgM 抗體 elisa 試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn) , O.D. 值大于或等于 Cut-Off 值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。

組成:

犬誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2/iNOS)ELISA試劑盒成分:

1 預(yù)包被板 : 抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 親合純化 96T

2 酶標(biāo)記抗體 : (30 倍濃縮 )HRP 標(biāo)記抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 親合純化 0.4mL x 1

3 標(biāo)準(zhǔn)品 : 重組小鼠白介素 -6 0.5mL x 2

4 EIA 緩沖液 : 含 1% BSA, 0.05% 吐溫 20 BPS 30mL x 1

5 標(biāo)記抗體稀釋液 : 含 1% BSA, 0.05% 吐溫 20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑 : TMB 底物液 15mL x 1

7 終止液 : 1N 硫酸 12mL x 1

樣本處理
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?span>,有條件的也可以-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
液體類(lèi)標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1.血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2.血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3.尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦眷液參照此實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清,
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。5.培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/m!左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。6.組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氨迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

試驗(yàn)原理:已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
elisa試劑盒安全性:
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2．實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。