植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學檢測技術，其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結合反應，通過酶促反應放大信號，檢測微量的蛋白質(zhì)、細胞因子等生物活性物質(zhì)。ELISA實驗中所需的試劑和耗材需滿足一定的質(zhì)量要求，以保證實驗結果的準確性和可靠性。

植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒

產(chǎn)品包裝：盒裝

性狀：瓶裝液體

規(guī)格：96T/48T

保存條件：2-8℃

保存期限：6個月

運輸條件：2-8℃低溫運輸，用干冰或者冰袋低溫運輸。

   標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N"倍，標本的濃度應再乘以“N"。 

   標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 

   生物su標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物su標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su標記抗體加990μl生物su標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 

   辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 

實驗步驟

1. 準備：準備好所有試劑、材料和器具。

2. 溫育：將包被有特異性抗體的酶標板放入37℃溫箱中溫育30分鐘。

3. 加樣：分別向各孔中加入標準品、待測樣本，輕輕混勻。

4. 溫育：將酶標板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

5. 洗滌：清洗酶標板，除去未結合的抗原抗體。

6. 加酶標二抗：向各孔中加入酶標二抗，輕輕混勻。

7. 溫育：將酶標板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

8. 洗滌：清洗酶標板，除去未結合的酶標二抗。

9. 加底物溶液：向各孔中加入底物溶液，輕輕混勻。

10. 顯色：將酶標板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育15分鐘。

11. 終止：向各孔中加入終止液，混勻。

12. 測量：在450nm波長下測量各孔的光密度值（OD值）。

結果判斷:

1. 每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數(shù)。 

實驗注意事項

1. 抗原和抗體的儲存：應嚴格按照說明書要求存放抗原和抗體，避免反復凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要保證試劑盒未過期，以獲得可靠的實驗結果。

2. 加樣技術：加樣時應保證加入的體積準確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時應在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔，以監(jiān)測加樣的準確性和重復性。

3. 溫育：溫育是ELISA實驗中的重要步驟，溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應的進行和結果的影響至關重要。必須嚴格按照說明書要求進行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

4. 洗滌：洗滌是ELISA實驗中重要的一步，它可以去除未結合的物質(zhì)，提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應保證每次洗滌時間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點

ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點主要包括：

1.操作簡單：該方法只需要一步操作即可完成，操作過程簡單明了，易于掌握。

2.快速：ELISA90分鐘一步法可以在短時間內(nèi)完成，適合于大批量樣品的快速檢測。

3.特異性高：該方法采用特定的抗體或抗原進行固定和檢測，因此具有較高的特異性。

4.靈敏度高：ELISA90分鐘一步法具有較高的靈敏度，可以檢測出較低濃度的抗原或抗體。

5.重復性好：該方法的重復性較好，結果較為穩(wěn)定。

6.安全性高：ELISA90分鐘一步法不使用放射性同位素等有害物質(zhì)，因此具有較高的安全性。

需要注意的是，ELISA90分鐘一步法也存在一些缺點，例如可能會受到非特異性干擾因素的影響，導致結果不準確。此外，該方法的試劑成本較高，不適合于小規(guī)模樣品的檢測。

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