本試劑盒只供體外研究使用，不用于臨床診斷 

猴血紅蛋白C(HbC)酶聯(lián)免疫試劑盒    

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿等。 

有效期：6 個月 

保存條件：2-8℃ 

試劑盒組成： 

備注： 

1. （96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。 

2. 標準品濃度依次為：200、100、50、25、12.5、0 μg/mL 

3. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提 供的檢測范圍內，實驗過程中直接取 50μL 樣本上樣即可。 當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本希釋液 將標本進行適當稀釋后再進行實驗。 

檢測前準備工作： 

1. 請?zhí)崆?20 分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。 

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正?，F(xiàn)象； 放置室溫，輕搖均勻，待結晶溶解后再配置洗滌液。 可將 20ml 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成 400ml 工作濃度的洗滌液，未用完的放回 4℃ 

3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份 20× 洗滌緩沖液加 19 份蒸餾水。

猴血紅蛋白C(HbC)酶聯(lián)免疫試劑盒   

實驗原理： 

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA）。往預先包被的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP 標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物 TMB顯色，TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗所需自備試驗器材： 

1. 酶標儀（450nm） 

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、 200-1000uL 

3. 37℃恒溫箱 

4. 蒸餾水或去離子水 

樣本處理及要求： 

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時 或 4℃過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或 將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 

2. 血漿：用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在 采集后的 30 分鐘內于 2-8℃ 1000×g 離心 15 分鐘，取上 清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免 反復凍融。 

3. 組織勻漿：用預冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除 殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重 后將組只剪碎。將剪碎的組織與對應體積的 PBS（一般按 1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應 9mL 的 PBS， 具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充 分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超 聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘，取上清檢測。

4. 細胞培養(yǎng)物上清：請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢 測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 

5. 其它生物標本：1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。 

6. 樣品外觀：樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。 

7. 樣品保存：樣品收集后若在 1 周內進行檢測的可保存于 4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃ （1 個月內檢測），或-80℃（6 個月內檢測），避免反復凍 融，標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進 行此項檢測。 

注意事項： 

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所 有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃。使用后立即冷 藏保存試劑。 

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡 量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。 

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。 

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不 能使用。 

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。 

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。 

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強 烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物 活性。 

9. 不能使用過期產(chǎn)品。 

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的 程序處理樣品和檢測裝置。 

操作步驟：

1．從室溫平衡 60min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板 條用自封袋密封放回 4℃。 

2．設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準 品 50μL。 

3．樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。樣本不足， 或者樣本濃度過高，可用樣本希釋液做稀釋。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化 物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應 孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 

5．棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）， 靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。 

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處 測定各孔的 OD 值。 

實驗結果計算： 

繪制標準曲線：以所測標準品的 OD 值為橫坐標，標準品的濃 度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得 到直線回歸方程，將樣品的 OD 值代入方程，計算出樣品的濃 度。 

 試劑盒性能： 

1. 檢測范圍：1.32 μg/mL –200 μg/mL。 

2. 靈敏度：檢測濃度小于 0.78 μg/mL。 

3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。 

4. 重復性：板內變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于 15% 。

 技術小提示： 

1. 當混合或重溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。 

2. 為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同 試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移 液槽。 

3. 每次孵育時，請正確使用封板膠可保證結果的準確性。 

4. 混合后的顯色底物在上板前應為無色，請避光保存；假如 微孔板后，將由物色變成不同深度的藍色。 

5. 終止液上板順序應同顯色底物上板順序一致；加入終止液 后，孔內顏色由藍變黃；若孔內有綠色，則表明孔內液體 未混勻；請充分混合。 

說明： 

1. 由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供 的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定 的質量技術風險。 

2. 最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及 當時的實驗環(huán)境密切相關，請務必準備充足的標本備份。 

3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈 敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內說明書進行實驗操 作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。 

4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能 混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說 明才會得到最佳的檢測結果。

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