猴正輔因子4(PC4)酶聯(lián)免疫試劑盒

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應的免疫學檢測方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結合，通過酶對底物反應的顯色反應，對樣本中的待測物質進行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡便、適用范圍廣等特點，因此在生物醫(yī)學研究、臨床診斷和食品安全檢測等領域得到了廣泛應用。

ELISA試劑盒用法

1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。

2.洗滌：棄包被液（用力拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。

3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。

4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

5.加樣：加入已經(jīng)稀釋好的樣品，37℃反應1h。一般血清樣本加入50-100μl，充分混勻。

6.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

7.加入酶標試劑：每孔加入100μl酶標溶液，37℃，1h。

8.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A液50μl，再加入顯色劑B液50μl，37℃避光10-15min。

10.終止及測定：加入50μl終止液，終止反應，用酶標儀在450nm波長處測OD值。

猴正輔因子4(PC4)酶聯(lián)免疫試劑盒 

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的抗原和其他雜質。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結合位點，以減少非特異性結合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的阻斷液和其他雜質。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的樣本和其他雜質。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結合的樣本中的待測物質發(fā)生反應。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的酶標抗體和其他雜質。

9. 顯色反應：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應：加入終止液，停止酶催化反應。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

實驗注意事項

1. 保證試劑盒的質量：選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的試劑盒，確保試劑盒的質量和穩(wěn)定性。

2. 嚴格控制實驗條件：實驗過程中要嚴格控制溫度、pH值、離子強度等條件，以保證實驗結果的準確性。

3. 避免交叉污染：實驗過程中要避免交叉污染，確保每個步驟使用的試劑和材料都是清潔無污染的。

4. 標準化操作：實驗操作要標準化，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，避免人為誤差對實驗結果的影響。

5. 定期校準：定期對實驗儀器進行校準，確保儀器的準確性和穩(wěn)定性。

6. 保存好實驗數(shù)據(jù)：實驗過程中要保存好實驗數(shù)據(jù)，以便后續(xù)分析和處理。

ELISA試劑盒實驗數(shù)據(jù)的計算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向導，在“標準類型"中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點擊完成?？傻们€圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線"，在類型中，選擇多項式;在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

植物樣本處理：

植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實組織，都應該采用鮮重的計重方式，一般要遵循以下原則：

    1.稱取的組織重量不能低于50mg。

    2.勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)

    3.組織在勻漿器勻漿過程中，勻漿液應該分2次加進去，這樣勻漿更充分。

    4.充分勻漿完成后離心取上清，離心機的轉數(shù)選取2000-3000轉每分，轉數(shù)不宜超過5000.離心時間為15-30分鐘。

新手實驗注意事項：

新手以及那些沒有固定協(xié)作供貨商的顧客購買時往往有兩種疑慮，首要便是價格，其次，便是質量，國內(nèi)試劑盒相關于進口試劑盒來說價格自然會低許多。關于新手的視點來說價格低并不必定就會考慮購買，同時還在猶疑質量問題，由于沒有用過新品牌的試劑盒心中總是在懷疑。利用交叉實驗即可辨別是否造假：小鼠ELISA檢測試劑盒說明書

1、取出購買的試劑盒A的包被板兩條。

2、一條包被板加試劑盒A的標準品做標準曲線。

3、另一條包被板加試劑盒B的標準品做標準曲線。

4、后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行，加檢測抗體、酶復合物和底物。

我司在科研領域積累了豐富的經(jīng)驗，正是為了幫助中國的相關單位能夠利用我司的經(jīng)驗與技術優(yōu)勢，為中國民眾提供更安全，快捷的生命領域。

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