土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒說明書

注意：正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

貨號：DM-W-B917

規(guī)格：100 管/48 樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

緩沖液：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存，使用前搖勻。試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

微量法

標準品：粉劑×1 瓶。5mg N-乙酰氨基葡萄糖，4℃保存。臨用前加入 2.27mL 蒸餾水配成10μmol/mL 的標準溶液。

產(chǎn)品說明：

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細胞壁中，而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點。

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進一步與 3,5-二硝基水楊酸產(chǎn)生棕紅色化合物， 在540nm 處有特征吸收峰，吸收值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

需自備的儀器和用品：

天平、水浴鍋、離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、蒸餾水。

操作步驟：

1、可見分光光度計/酶標儀預熱 30min。波長調(diào)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將標準溶液稀釋為 5、4、3、2、1μmol/mL 的標準溶液備用。

3、在 EP 管中分別加入：

三、計算公式

標準曲線的建立：以濃度（y） 為縱坐標，ΔA 標準（x）為橫坐標建立標準曲線。

以ΔA 標準為 y 軸，標準溶液濃度為 x 軸，繪制標準曲線，得到標準方程 y=kx+b。將ΔA 測定帶入標準方程中，得到 x（μmol/mL）

酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μmol N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活力（U /g 土樣）＝ y×V 反總÷W÷T =3.12×y÷W

T：反應時間，1/24d； V 反總：反應體系總體積：0.13mL；W：樣品質(zhì)量，0.02g。